赭曲霉毒素B檢測：保障食品安全的關鍵環節

赭曲霉毒素B(Ochratoxin A, OTA)是由曲霉屬(如赭曲霉)和青霉屬某些菌株產生的次級代謝產物，是一種具有強腎毒性、肝毒性、免疫抑制、致畸性和致癌性(被國際癌癥研究機構IARC歸為2B類)的真菌毒素。它在范圍內廣泛污染谷物(如小麥、玉米、大麥、燕麥)、咖啡豆、葡萄及葡萄酒、香料、干果以及動物飼料等。由于其理化性質穩定，能在食物鏈中累積并最終進入人體，對食品安全和人類健康構成嚴重威脅。因此，建立準確、靈敏、高效的赭曲霉毒素B檢測方法，對于監控農產品的污染狀況、執行食品法規限量標準、保障消費者食用安全和促進國際貿易至關重要。

檢測項目

赭曲霉毒素B檢測的核心目標是定量或定性地測定各類食品、農產品、飼料及部分動物源性食品(如豬腎)中OTA的含量。主要檢測項目聚焦于：谷物及其制品(面粉、面包、早餐谷物等)、咖啡及咖啡制品、葡萄酒/葡萄汁/葡萄干、啤酒、香料、嬰幼兒食品、飼料原料及成品飼料等。檢測結果需嚴格對照國家及國際法規設定的最大殘留限量(MRL)進行評判。

檢測儀器

現代赭曲霉毒素B檢測依賴于多種精密分析儀器，以確保結果的準確性和可靠性：

1. 液相色譜儀(LC): 尤其高效液相色譜(HPLC)是檢測OTA的主流儀器，常配備熒光檢測器(FLD)。由于OTA具有天然熒光特性，HPLC-FLD方法靈敏度高、選擇性好、應用廣泛。

2. 液相色譜-串聯質譜聯用儀(LC-MS/MS): 目前公認的“金標準”技術。具有極高的選擇性和靈敏度，能有效排除復雜基質干擾，實現痕量(ppb甚至ppt級)OTA的準確定量，并能同時檢測多種真菌毒素。特別適用于法定確認分析和仲裁。

3. 免疫分析儀器： 包括酶聯免疫吸附測定(ELISA)微孔板讀數儀、熒光免疫層析/光激化學發光讀數儀等。基于抗原抗體特異性反應，適用于大批量樣品的快速篩查。

4. 樣品前處理設備： 如免疫親和柱(IAC)操作裝置、固相萃取(SPE)裝置、均質器、振蕩器、離心機、氮吹儀等，用于高效凈化和富集樣品中的OTA。

檢測方法

赭曲霉毒素B的檢測通常包含樣品提取、凈化和儀器分析三個主要步驟：

1. 樣品提取： 常用酸性或中性有機溶劑(如乙腈-水-乙酸混合液、甲醇-水混合液)進行振蕩或均質提取，將OTA從復雜的基質中溶解出來。

2. 凈化： 關鍵步驟，用于去除干擾物質。主要方法包括：
? 免疫親和柱(IAC)凈化： 利用OTA特異性抗體，選擇性吸附目標物，洗脫后得到高純度OTA溶液。凈化效果優異，是LC-FLD和LC-MS/MS常用的前處理方法。
? 固相萃取(SPE)凈化： 利用C18、Mycosep多功能凈化柱等，基于吸附劑與目標物/干擾物不同的親和力進行分離。

3. 儀器分析：
? HPLC-FLD法： 經IAC或SPE凈化的樣品，在HPLC上進行分離。OTA在激發波長~333nm、發射波長~460nm處有強熒光響應，通過峰面積或峰高外標法定量。方法成熟、穩定，是常用的標準方法。
? LC-MS/MS法： 凈化后的樣品進入LC-MS/MS系統。色譜分離后，OTA在質譜中通過特定的母離子/子離子對(如m/z 404 → 239, 358)進行多重反應監測(MRM)，實現高靈敏度、高選擇性的定性和定量。是確證和痕量分析的首選。
? ELISA法： 將提取液(通常需稀釋)加入包被了OTA抗體的微孔板中，再加入酶標記的OTA(競爭法)或酶標記的二抗(間接法)，通過底物顯色，用酶標儀測定吸光度。吸光度值與OTA濃度呈反比，通過標準曲線定量。操作相對簡便，適合大批量篩查。

檢測標準

赭曲霉毒素B的檢測和限量標準由各國政府和國際組織制定，為檢測提供法定依據和評價基準：

? 國際食品法典委員會(CAC): 為協調貿易，CAC制定了谷物、葡萄酒等產品中OTA的限量標準和推薦檢測方法(如Codex Stan 193)。

? 歐盟(EC): 擁有最嚴格的OTA限量法規。主要規定(如EU No 1881/2006及其修訂版)涵蓋谷物、葡萄干、咖啡、葡萄酒、嬰幼兒食品等多種產品。同時，歐盟發布了官方檢測方法(如EN 14132:2009 - HPLC-FLD法測定食品中OTA)。

? 中國：
- 限量標準: 主要依據《食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017)，對谷物、豆類、葡萄酒、咖啡等規定了OTA的最大限量。
- 檢測方法標準: 國家標準提供了多種可靠方法：
    ? GB 5009.96-2016 《食品安全國家標準 食品中赭曲霉毒素A的測定》 - 規定了HPLC-FLD法、HPLC-MS/MS法、ELISA法。
    ? GB/T 30957-2014 《飼料中赭曲霉毒素A的測定 免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》。
    ? GB 5009.222-2016 《食品安全國家標準 食品中赭曲霉毒素A的測定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法》等。

? 美國： FDA雖未設定OTA的法定限量，但發布了指導值(Guidance Levels)。美國官方化學家協會(AOAC)和國際谷物科技協會(ICC)也發布了認可的檢測方法(AOAC Official Methods, ICC Standards)。

綜上，赭曲霉毒素B的檢測是一個技術集成度高的過程，需要根據檢測目的(篩查/確證)、樣本基質、預算和法規要求，選擇合適的檢測方法(ELISA/HPLC/LC-MS/MS)和對應的國家標準或國際標準。高效的樣品前處理(特別是IAC凈化)與高靈敏、高特異的分析儀器(尤其是LC-MS/MS)相結合，是獲得準確可靠檢測結果、確保食品安全防線的重要保障。