果糖+葡萄糖含量（以干物質(zhì)計(jì)）檢測

在食品、農(nóng)產(chǎn)品、飲料、蜂蜜、果葡糖漿等相關(guān)行業(yè)中，準(zhǔn)確測定總還原糖的含量，特別是其中果糖和葡萄糖的加和含量，是一項(xiàng)至關(guān)重要的質(zhì)量控制與營養(yǎng)評(píng)估指標(biāo)。將結(jié)果表示為“以干物質(zhì)計(jì)”，即基于產(chǎn)品中去除水分后的干基含量進(jìn)行計(jì)算，是為了消除不同批次或不同產(chǎn)品間因水分含量差異造成的影響，從而提供更客觀、可比較的糖分含量數(shù)據(jù)。這對(duì)于評(píng)價(jià)產(chǎn)品甜度、發(fā)酵性能、貨架期穩(wěn)定性以及是否符合相關(guān)法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)（如純蜂蜜的真?zhèn)舞b別、果葡糖漿的等級(jí)劃分）具有核心意義。本檢測項(xiàng)目旨在精確測定樣品中果糖和葡萄糖的總和，并以干物質(zhì)含量為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)。

檢測項(xiàng)目

本次檢測的核心項(xiàng)目是：**樣品中果糖與葡萄糖的總含量（Fructose + Glucose Content, expressed on a dry matter basis）**。具體內(nèi)容包括：

• 定量測定樣品中果糖（Fructose）的濃度。
• 定量測定樣品中葡萄糖（Glucose）的濃度。
• 計(jì)算果糖與葡萄糖濃度的加和值。
• 測定或已知該樣品對(duì)應(yīng)的干物質(zhì)（或總固形物）含量。
• 將測得的果糖+葡萄糖含量結(jié)果換算至以干物質(zhì)為基準(zhǔn)的數(shù)值（通常表示為 g/100g 干物質(zhì) 或 % w/w 干基）。

檢測儀器

完成此項(xiàng)目檢測通常需要依賴高精度、高靈敏度的分析儀器，主要包括：

• 高效液相色譜儀： 配備示差折光檢測器（HPLC-RID）或蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELSD）是最為常用和推薦的方法。HPLC能夠有效分離果糖、葡萄糖與其他糖類（如蔗糖、麥芽糖）及干擾物質(zhì)。RID和ELSD對(duì)糖類響應(yīng)良好，無需衍生化。
• 離子色譜儀： 配備脈沖安培檢測器（IC-PAD），對(duì)糖類特別是單糖具有高選擇性和靈敏度。
• 酶法分析系統(tǒng)： 使用特定的酶試劑盒（如己糖激酶/葡萄糖-6-磷酸脫氫酶法測定葡萄糖，磷酸葡萄糖異構(gòu)酶法測定果糖），通常在分光光度計(jì)或生化分析儀上進(jìn)行。此法特異性強(qiáng)，但需要分別測定葡萄糖和果糖后再加和。
• 折光儀： 用于快速測定總可溶性固形物（Total Soluble Solids, TSS）含量，此數(shù)值通常近似作為干物質(zhì)含量（或用于計(jì)算干物質(zhì)含量），用于結(jié)果的干基換算。
• 烘箱/真空干燥箱： 用于直接測定樣品的水分含量或干物質(zhì)含量（參照標(biāo)準(zhǔn)干燥失重法）。
• 分析天平： 精確稱量樣品和標(biāo)準(zhǔn)品（精度至少0.0001g）。
• 超聲波清洗器/恒溫水浴鍋/離心機(jī)： 用于樣品前處理（溶解、提取、除蛋白、除雜、定容等）。
• 微孔濾膜與過濾器： 用于HPLC/IC進(jìn)樣前樣品的過濾凈化（常用0.45μm或0.22μm水相濾膜）。

檢測方法

目前主流的、具有標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)的檢測方法有：

• 高效液相色譜法（HPLC-RID/ELSD）：
  1. 樣品前處理： 精確稱取代表性樣品，用水或特定溶劑（如乙腈-水）溶解、稀釋、定容。必要時(shí)進(jìn)行超聲助溶、離心、過濾（去除蛋白質(zhì)、脂肪、顆粒物等干擾）。對(duì)于復(fù)雜基質(zhì)，可能需采用固相萃取（SPE）、酶解（如淀粉需水解）或沉淀法純化。
  2. 色譜條件： 使用氨基柱（如NH2柱）或糖分析專用柱，以乙腈-水混合溶液（如75:25或80:20 v/v）作為流動(dòng)相（等度或梯度洗脫），流速通常為0.8-1.5 mL/min。柱溫控制在30-40°C。RID檢測器溫度需恒定（通常30-40°C）。
  3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制： 用果糖和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品配制系列濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析，繪制峰面積-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  4. 樣品測定與計(jì)算： 處理好的樣品溶液進(jìn)樣分析，根據(jù)果糖和葡萄糖的保留時(shí)間定性，根據(jù)峰面積在各自標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得濃度（C_樣）。計(jì)算樣品中果糖含量和葡萄糖含量，再相加得到果糖+葡萄糖總含量（mg/g 或 g/100g 濕基）。
• 離子色譜法（IC-PAD）： 前處理類似HPLC。使用高pH氫氧化鈉/醋酸鈉梯度溶液為淋洗液，金電極PAD檢測。分離效果好，靈敏度高。
• 酶法：
  1. 葡萄糖測定： 使用己糖激酶（Hexokinase）和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase）試劑盒，在340nm監(jiān)測NADPH的生成量計(jì)算葡萄糖含量。
  2. 果糖測定： 在完成葡萄糖測定的反應(yīng)液中加入磷酸葡萄糖異構(gòu)酶（Phosphoglucose isomerase），將樣品中的果糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖-6-磷酸，繼續(xù)反應(yīng)并監(jiān)測NADPH生成總量，減去第一步測得的葡萄糖對(duì)應(yīng)的NADPH量，計(jì)算出果糖含量。最后將葡萄糖含量與果糖含量相加。
• 干物質(zhì)含量測定：
  1. 折光法： 用折光儀測定樣品的可溶性固形物含量（°Brix），此值在多數(shù)情況下（特別是糖溶液）可近似視為干物質(zhì)含量（% w/w）。
  2. 烘箱干燥法（標(biāo)準(zhǔn)法）： 精確稱取樣品（m_濕）于已恒重的稱量皿中，置于105±2°C烘箱（或特定真空/溫度條件）中干燥至恒重（m_干）。干物質(zhì)含量（DM, %）= (m_干 / m_濕) × 100%。
• 最終結(jié)果計(jì)算（以干物質(zhì)計(jì)）： 果糖+葡萄糖含量（濕基, % w/w） = (C_果+葡 × V × F) / (m_樣 × 1000) × 100%
  其中：C_果+葡為測得的果糖+葡萄糖濃度（mg/mL），V為定容體積（mL），F(xiàn)為稀釋因子，m_樣為稱樣量（g）。
  果糖+葡萄糖含量（以干物質(zhì)計(jì), % w/w） = [果糖+葡萄糖含量（濕基, % w/w） / 干物質(zhì)含量（DM, % w/w）] × 100%

檢測標(biāo)準(zhǔn)

為確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可比性，該項(xiàng)目的檢測通常遵循以下國內(nèi)外權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)：

• GB 5009.8-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定： 中國國家標(biāo)準(zhǔn)，第一法即為高效液相色譜法（HPLC-RID）。詳細(xì)規(guī)定了樣品處理、儀器條件、計(jì)算方法和精密度要求。適用于食品中上述糖類的測定。
• GH/T 18796-2012 蜂蜜： 中國供銷合作行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（商業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)）。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蜂蜜中果糖和葡萄糖含量（兩者之和）的測定方法（通常采用HPLC法），并明確要求結(jié)果報(bào)告應(yīng)包含“以干物質(zhì)計(jì)”。是鑒別蜂蜜真?zhèn)魏推焚|(zhì)的關(guān)鍵指標(biāo)。
• AOAC Official Method 977.20 / 980.13 / 982.14： 國際AOAC（國際分析
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